🔬 Gao, Ma, Yu y colegas presentan en Nature KNIT, un sistema CRISPR para insertar fragmentos de ADN de 0,7 kb a más de 10 kb sin cortar la doble hebra. En células y modelos de ratón, logró hasta 89 % de eficiencia y redujo indels, translocaciones y edición fuera de objetivo.
La promesa es clara: hacer knock-in de genes con precisión, algo útil para enfermedades genéticas y terapias celulares. El problema es que integrar fragmentos grandes de ADN sigue siendo difícil, sobre todo si el método rompe ambas hebras del ADN y deja resultados no deseados.
KNIT acopla una nickasa Cas9 con un sistema que recluta el ADN donante. Así permite insertar secuencias grandes en distintos loci y tipos celulares. El sistema también soportó inserciones repetidas y knock-in en varios loci con translocaciones mínimas. Una versión mejorada, KNIT editor 2, elevó la eficiencia con una sola transfección.
En células mutantes con una mutación patológica, KNIT restauró la expresión génica normal al insertar un gen terapéutico en un locus seguro o en su locus nativo. También permitió diseñar células CAR-T sin vectores virales y sin roturas de doble hebra; esas células mostraron actividad antitumoral in vitro y en modelos de ratón.
✅ Este trabajo apunta a una vía más precisa para insertar genes grandes y fabricar terapias celulares programables. El límite clave: los datos proceden de células y modelos de ratón, no de ensayos clínicos en pacientes. Además, H.W., Y.G. y Y.M. declararon patentes relacionadas con la integración de ADN descrita en el artículo.
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